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2020-06-29 03:41

  d Repair/dA-Tailing Module是针对Illumina®高通量测序平台文库构建而专业设计的DNA末端修复/A尾添加模块,具有高效、快速、易实现自动化的优势。本产品兼容1ng-1 μg片段化InputDNA,可在单管内实现片段化DNA的末端补平、5端磷酸化和3端加A尾反应,得到5末端含磷酸基团且3末端带有dA突出的DNA产物。该产物无需纯化,即可使用Hieff NGS®Fast-Pace DNA Ligation Module(Cat#12607)进行文库构建接头连接反应。

  2. 核酸内切酶活性:50 μL反应体系中加入10 μL本酶和1 μg φX174 RF I DNA,37°C孵育4小时。经琼脂糖凝胶电泳检测,RF II转化比率

  3. 磷酸酶活性:在磷酸酶活性检测缓冲液中加入10 μL本酶和2.5 mM对硝基苯磷酸,37°C孵育4小时。经光谱测定法检测,405 nm处无对硝基苯阴离子特征吸收峰。

  4. 磷酸酶活性:在磷酸酶活性检测缓冲液中加入1×Fast-Pace End Repair/dA-Tailing Buffer和2.5 mM对硝基苯磷酸,37°C下孵育4小时。经光谱测定法检测,405 nm处无对硝基苯阴离子特征吸收峰。

  4. 将上述PCR管置于PCR仪,设置表2所示反应程序,进行末端修复/dA尾添加反应。

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